InvivoGen提供多種RIG-I和STING相關產品

RIG-I信號通路

RIG-I配體

? 5’ppp-dsRNA

5’ppp-dsRNA是一種5’三磷酸雙鏈RNA，通過一個由19個核酸分子通過磷酸二酯鍵聚合成的5’三磷酸單鏈RNA和其非三磷酸互補鏈雜交形成。5’ppp-dsRNA的序列可以通過篩選各種序列突變體確定。未加帽的5’三磷酸雙鏈RNA能夠被RIG-I特異性識別。

? 3p-hpRNA

3p-hpRNA是通過體外轉錄甲型流感病毒（H1N1）序列而產生的5’三磷酸發夾RNA。這個有87個核酸分子的RNA寡核苷酸含有未加帽的5`三磷酸酯末端和雙鏈片段，它們是RIG-I識別的特征結構。3p-hpRNA是RIG-I的一種有效并特異性的激動劑。

RIG-I/MAVS 報告基因細胞

InvivoGen提供一系基于人源肺癌細胞株A549，小鼠巨噬細胞RAW和人源胚腎細胞HEK293穩轉細胞系，助力RNA感受器RIG-I信號通路的研究。這些細胞系包括RIG-I或MAVS基因的敲除細胞株（衍生自A549或RAW細胞系）或者RIG-I基因的過表達細胞株（衍生自HEK-293細胞系）。

? A549-Dual?

? A549-Dual? KO-RIG-I 

? A549-Dual? KO-MAVS

? HEK-Lucia? Null

? HEK-Lucia? RIG-I

? RAW-Lucia? ISG

? RAW-Lucia? ISG KO-RIG-I

? RAW-Lucia? ISG KO-MAVS

描述

所有的RIG-I/MAVS報告基因細胞系均表達一個含有分泌型熒光素酶基因ISG（干擾素刺激基因）誘導型構件。活化RIG-I/MAVS信號通路可誘導ISG啟動子的活化并產生熒光素酶，該酶存在于細胞上清并能夠通過熒光素酶檢測試劑QUANTI-Luc?檢測定量。源于A549的細胞攜帶一個額外的NF-κB誘導表達分泌型堿性磷酸酶（SEAP）基因構件，該酶的活性能夠通過SEAP檢測試劑QUANTI-Blue?檢測定量。

這些RIG-I/MAVS報告基因細胞株攜帶Zeocin?單抗性基因或Zeocin?和Blasticidin（參見最后一頁）雙抗性基因。

結果

使用RIG-I激動劑，復合了LyoVec?的5’ppp-dsRNA和3p-hpRNA刺激A549-Dual?和RAW-Lucia? ISG細胞系，ISG應答顯著。在A549-Dual?細胞中3p-hpRNA激動性強度明顯高于5’ppp-dsRNA，30 ng/ml的3p-hpRNA復合物活化信號已明顯高于300 ng/ml 5’ppp-dsRNA的復合物。相反，在RIG-I-KO或MAVS-KO細胞株中應答消失。使用RIG-I配體刺激HEK-Lucia?對照細胞時ISG反應很弱。而在HEK-Lucia? RIG-I細胞中，由于RIG-I基因的組成型過表達導致這種應答尤為強烈。同樣，當使用3p-hpRNA和5’ppp-dsRNA時觀察到更高水平的ISG應答。在衍生自A549的細胞株中NF-κB對于RIG-I配體的反應跟ISG應答是相似的，雖然前者更弱一些（參考網站數據）。

ISG對RIG-I配體的反應：使用300 ng/ml的5’ppp-dsRNA或30 ng/ml的3p-hpRNA刺激衍生自A549的細胞；使用1 μg/ml 5’ppp-dsRNA或3p-hpRNA刺激衍生自RAW和HEK293的細胞。經過孵育過夜，可使用QUANTI-Luc?檢測上清中Lucia熒光素酶活性的相對光單位（RLUs）以測試ISG的反應。

相關產品

l STING突變株

STING SAVI報告基因細胞株

InvivoGen提供給一系列基于人源THP1單核細胞系的STING突變體的報告基因細胞株。其中，有兩款表達STING- associated vasculopathy with onset in infancy（SAVI）的功能獲得性突變體(S154 and M155)。SAVI患者在STING蛋白中顯示出單一突變，導致其持續激活和ISG的過度活化。S154是新生突變[1]，M155是遺傳突變[2]。STING SAVI報告基因細胞株是篩選STING通路抑制劑便捷有力的工具。

? THP1-Dual? KI-hSTING-S154     ? THP1-Dual? KI-hSTING-M155

描述

THP1-Dual? KI-hSTING-S154細胞和THP1-Dual? KI-hSTING-M155細胞均來自THP1-Dual? KO-STING細胞，該細胞衍生自THP-1細胞，穩定敲除了內源性人源STING的雙等位基因并穩定整合了兩種可誘導分泌的報道基因（Lucia螢光素酶和SEAP（分泌型胚胎堿性磷酸酶）。THP1-Dual? KO-STING細胞敲入了“野生型”R232人源STING突變體[3]的無內含子編碼序列和一個S154 或M155突變位點。IRF3和NF-κB通路能夠通過分別測試Lucia熒光素酶或SEAP活性進行檢測。細胞培養上清中的報告基因蛋白活性能夠使用QUANTI-Luc? and QUANTI-Blue?檢測試劑進行檢測。SAVI報告基因細胞對Blasticidin和Zeocin?有抗性。

結果

功能獲得(Gain-of-function)的活化-THP1-Dual? KI-hSTING-S154細胞和THP1-Dual? KI-hSTING-M155細胞均均可以持續活化ISG，而THP-1-Dual? KI-hSTING-R232卻不能。加入IFN-β或STING激動劑將進一步促進ISG的活化。注意，結果已被非刺激細胞背景信號標準化。因為其持續活化STING的特性，SAVI細胞的背景非常高，誘導ISG應答的增加倍數低于R232對照細胞。
       抑制劑功能-加入TBK-1抑制劑BX795，或Brefeldin A，一種抑制蛋白從ER轉運到高爾基體的蛋白轉運抑制劑，能夠顯著抑制SAVI細胞中STING信號的轉導。所以，這些細胞能夠用于篩選STING的抑制劑。

1. Munoz J. et al., 2015. Stimulator of interferon genes-associated vasculopathy with onset in infancy: a mimic of childhood granulomatosis with polyangiitis. JAMA Dermatology 151: 872-7.

2. Jeremiah N. et al., 2014. Inherited STING-activating mutation underlies a familial inflammatory syndrome with lupus-like manifestations. The Journal of Clinical Investigation 124: 5516-20.

3. Yi G. et al., 2013. Single nucleotide polymorphisms of human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides. PLOS ONE 8: e77846。

對IFN-β或STING激動劑的ISG應答：使用104 U/ml IFN-β, 10 μg/ml 2’3’ cGAMP或2’3’ cGAMP(PS)2(Rp/Sp), 30 μM BX795 or 10 μg/ml Brefeldin A刺激衍生自THP1-Dual?細胞。孵育過夜后，通過使用QUANTI-Luc?檢測上清中Lucia熒光素酶活性測試ISG應答。Bar值表示非刺激細胞中背景信號標準化的活性百分比。

相關產品

STING 篩選服務

InvivoGen提供一系列STING篩選服務的選擇，用于鑒定激活或抑制一些STING突變體的分子。欲知更多信息請聯系我們。

重組人源STING蛋白

STING通過胞漿區域與CDNs結合。InvivoGen提供的重組STING蛋白對應可溶性的胞漿結構域（aa 137-379）R232突變型，是普遍的人源STING蛋白的同型。這個27kDa的重組蛋白產生自哺乳動物中國倉鼠卵巢細胞系（CHO），通過親和層析純化，不帶標簽，能夠被市面上的商品化人源STING抗體所識別。

l 基因篩選抗生素

細胞培養測試的抗生素

? 無菌

? 無內毒素

? 驗證篩選功能

InvivoGen提供一系列細胞培養測試的抗生素以確保無假陰性篩選穩轉哺乳動物細胞株。這些抗生素無菌且無內毒素污染以避免細菌內毒素，也被稱為LPS，對轉染細胞造成的有害影響。InvivoGen嚴格驗證產品的物理化學，通過微生物和細胞培養以確保其功能活性。所有出品的抗生素被證實對哺乳動物細胞表現出長期的穩定性并且沒有細胞毒性。

InvivoGen的篩選抗生素可與其他篩選抗生素或與細胞培養過程中預防支原體，細菌，真菌污染的抗微生物抗生素聯合使用。有不同的規格可供選擇。

相關產品

InvivoGen 1977年成立于法國，是法國較早的生物科技公司。公司成立的初期階段主要提供細胞培養相關試劑，如抗支原體、細菌、真菌污染的抗生素以及基因篩選抗生素（Blasticidin, Puromycin, Hygromycin B, G418, Zeocin）。隨著天然免疫研究熱點的興起，InvivoGen于2000年開始致力于天然免疫相關產品的研發和生產，并成為全世界優質、專業的天然免疫相關產品生產商。InvivoGen為天然免疫研究提供一整套研究方案，包括不斷更新的模式識別受體（PRRs）激動劑和拮抗劑，PRRs報告基因細胞以及天然免疫信號通路的誘導劑和抑制劑等。