酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)（ELISPOT）技術(shù)是當(dāng)今世界上檢測(cè)生物體細(xì)胞免疫水平的技術(shù)。它集高靈敏度、高可信度、高通量、單細(xì)胞水平、功能性檢測(cè)與低成本等諸多優(yōu)點(diǎn)于一身，在國(guó)內(nèi)外免疫學(xué)界獲得了廣泛的應(yīng)用，成為主流免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)之一。我們來(lái)一一詳述這些優(yōu)點(diǎn)。

靈敏度高 
理論上，ELISPOT高達(dá)百萬(wàn)分之一，也就是說(shuō)哪怕一百萬(wàn)個(gè)陰性細(xì)胞中只有一個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞，ELISPOT能把這個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè)出來(lái)。說(shuō)來(lái)也沒(méi)什么神奇之處，只要細(xì)胞狀態(tài)好，陰性細(xì)胞就不會(huì)產(chǎn)生斑點(diǎn)。而有一個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞，就會(huì)產(chǎn)生一個(gè)斑點(diǎn)，反過(guò)來(lái)，一個(gè)斑點(diǎn)就證明了一個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞的存在，樣哪怕這個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞混雜在一百萬(wàn)個(gè)陰性細(xì)胞中，ELISPOT能把這個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè)出來(lái)。

實(shí)踐中，由于一個(gè)ELISPOT孔容納不了100萬(wàn)細(xì)胞，只能放50-60萬(wàn)細(xì)胞。再者，50-60萬(wàn)陰性細(xì)胞出一兩個(gè)自發(fā)斑點(diǎn)也算正常，所以實(shí)驗(yàn)組的孔要想有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，需要出4-5個(gè)斑點(diǎn)。這也就是說(shuō)，只要陽(yáng)性細(xì)胞頻率大于4個(gè)/60萬(wàn)細(xì)胞，就可以被ELISPOT檢測(cè)出來(lái)。這算出來(lái)的實(shí)際靈敏度為十五萬(wàn)分之一。這樣的靈敏度在一般客戶的實(shí)驗(yàn)室都能達(dá)到，如果實(shí)驗(yàn)再精細(xì)一些，細(xì)胞處理得再好一些，靈敏度還可以提高一倍，達(dá)到三十萬(wàn)分之一。作為對(duì)比，采用流式細(xì)胞儀的方法（細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法），對(duì)于陽(yáng)性細(xì)胞的檢測(cè)靈敏度只有千分之一，比ELISPOT技術(shù)要低兩個(gè)數(shù)量級(jí)！

單細(xì)胞水平 
與流式技術(shù)一樣，ELISPOT也是一種單細(xì)胞水平的檢測(cè)。作為對(duì)比，ELISA法、51Cr釋放法、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)法都是群體水平的檢測(cè)。如果群體細(xì)胞因子水平提高，既有可能是分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞數(shù)量增加，也有可能是分泌細(xì)胞的數(shù)量沒(méi)增加而單個(gè)分泌水平增加。這種區(qū)別對(duì)研究生物體的細(xì)胞免疫是很重要的，但是群體水平的檢測(cè)不能區(qū)別出來(lái)，只有單細(xì)胞水平的檢測(cè)能夠勝任。也就是說(shuō)，單細(xì)胞水平的檢測(cè)可以提供更多的信息。

功能性檢測(cè) 
ELISPOT檢測(cè)到的細(xì)胞因子不是實(shí)現(xiàn)存在的，而是在檢測(cè)的過(guò)程中，被加入的刺激物刺激而分泌出來(lái)的。斑點(diǎn)的強(qiáng)弱和數(shù)量反映了細(xì)胞對(duì)刺激物的反應(yīng)能力和分泌細(xì)胞因子的能力，這是體現(xiàn)細(xì)胞免疫反應(yīng)的重要的功能指標(biāo)。作為對(duì)比，ELISA只能檢測(cè)細(xì)胞的遺留物，充其量就是間接的反映了細(xì)胞功能。而流式細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法需要的把本該分泌出來(lái)的細(xì)胞因子人為的囚禁在細(xì)胞之內(nèi)，因能反映細(xì)胞應(yīng)對(duì)刺激生產(chǎn)細(xì)胞因子的能力，不能反映其分泌細(xì)胞因子的能力，畢竟細(xì)胞因子要分泌到包外才能發(fā)揮功能活力。另外，流式方法也不能去除一類假陽(yáng)性細(xì)胞，這類細(xì)胞的細(xì)胞因子含量豐富，但是沒(méi)有分泌功能。

實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè) 
ELISPOT是在96孔微孔板上進(jìn)行的，是一種高通量的檢測(cè)與篩選方法。一位有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)者一次可以處理上百份細(xì)胞樣品與數(shù)十種抗原，測(cè)定它們的反應(yīng)強(qiáng)度。作為對(duì)比，流式方法的樣品細(xì)胞需要在獨(dú)立的離心管中進(jìn)行，遠(yuǎn)未實(shí)現(xiàn)高通量，工作效率要低很多。

直觀，可信度高 
相對(duì)ELISA法、流式細(xì)胞因子染色法、測(cè)CTL的51Cr釋放法而言，ELISPOT是直觀的方法，一個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞一個(gè)斑點(diǎn)，清清楚楚，毫無(wú)疑問(wèn)。只要實(shí)驗(yàn)遵循標(biāo)準(zhǔn)化的操作方法，該檢測(cè)的重復(fù)性很好。另外，ELISPOT檢測(cè)的樣品細(xì)胞可以在液氮里面長(zhǎng)期冷凍存放，治療（或者免疫）前后的細(xì)胞可以做對(duì)比檢測(cè)，細(xì)胞免疫水平的變化一目了然，可信度高。

檢測(cè)成本低 
流式方法需要昂貴復(fù)雜的流式細(xì)胞儀，但是ELISPOT檢測(cè)并不需要特殊的儀器設(shè)備，充其量在檢測(cè)規(guī)模擴(kuò)大了之后需要購(gòu)置全自動(dòng)的斑點(diǎn)圖像分析儀。另外，ELISPOT試劑相對(duì)于ELISA與流式抗體也要便宜很多。達(dá)科為公司代理的進(jìn)口U-CyTech未包被ELISPOT試劑盒，96test價(jià)格在1000元左右，達(dá)科為公司推出的Quick Spot系列預(yù)包被ELISPOT試劑盒的價(jià)格也不到2000元。可以說(shuō)，ELISPOT是一項(xiàng)功能強(qiáng)大、物美價(jià)廉的檢測(cè)技術(shù)。